抗体偶联药

• 浓度测定：分光光度法
• 内毒素测定：LAL法
• 抗体交联率（DAR）测定：紫外分析法(UV/Vis)，液相-质谱联用(LC-MS)， 疏水液相色谱(HPLC-HIC)，毛细管等电聚焦(iCIEF)等
• 纯度检测：尺寸排阻液相色谱法(SEC)/ 反相液相色谱法(RP)/疏水液相色谱法(HIC),凝胶电泳(SDS-PAGE)等方法
• 小分子药物残留分析: 液相-质谱/质谱(LC-MS/MS)
• 有机溶剂残留: 气相色谱法
• 偶联位点分析: 液相-质谱联用(LC-MS)
• 无菌鉴定：膜过滤法或直接接种法

LC-MS analysis for DAR determination

Correlation of DAR determined by LC-MS and UV 252/280nm

Peptide Mapping Analysis

• 抗原结合活性检测: 免疫酶联吸附法(ELISA), 流式细胞检测法(FACS)，表面等离子共振（Biacore）
• 体外药效与生物活性检测：细胞毒杀伤实验，细胞内吞检测

成熟的抗体与ADC结合活力检测（ELISA和FACS）

与原始的未偶联的抗体相比，ADC 保留了与裸抗相似的抗原结合活性，左图为ELISA检测与抗原蛋白的结合活性，右图为流式细胞检测与阳性细胞的结合活性。

• 体外药效与生物活性分析：细胞毒杀伤实验，抗体内吞测试等

免疫荧光实验检测不同靶点及不同细胞株的裸抗与ADC的内吞活性

成熟的细胞毒性实验检测抗体与ADC的体外药效

• Antigen binding activity determination: ELISA, FACS
• Drug to Antibody ration (DAR) determination: UV-Vis, LC-MS, HPLC-HIC, iCIEF, etc.
• Residues of free drug determination: LC-MS/MS
• In vitro efficacy and bioactivity determination: Cytotoxicity assay

• 小鼠、大鼠、猴通过SC，IP，IV等方式注射
• 生物分析方法开发
• 药代/药动动物模型建模与模拟
• 生物基质中体外稳定性分析
• 单剂量，多剂量，以及不同动物中的剂量优化
• 药效学试验
• 超过160种肿瘤细胞系异种皮下移植瘤模型（CDX）以及270种 人源性肿瘤组织异种皮下移植瘤模型（PDX）
• 生物学分布
• 标记的裸抗或ADC在动物体内影像学分析
• 动物各组织中的体外药物浓度分析

在此案例中，我们的科研人员合成了Herceptin-DM1，并用体外繁殖模型以及体内皮下移植瘤模型对其进行了鉴定。合成的T-DM1显示了与商业化产品一致的生物活性，体内药理表现以及安全性描述。