β-分泌酶（BACE1）启动淀粉样前体蛋白（APP）生成毒性淀粉样β肽（Aβ）的过程，该过程被广泛认为在阿尔茨海默病（AD）的发病机制中起关键作用。本研究建立并验证了一种新型微流控迁移率变化实验（MMSA），并将其应用于AD的BACE1抑制剂筛选。首先，以来源于瑞典突变型APP的新型荧光多肽底物（FAM-EVNLDAEF）建立BACE1活性检测方法；在荧光定量前通过电泳将多肽底物与裂解产物（FAM-EVNL）分离，从而在终点法和动力学模式下均获得高质量的比率型数据。为验证该方法，评估了两种已知抑制剂（AZD3839和AZD3293）的抑制活性与动力学参数，结果与其他方法报道的数值高度一致。最后，采用384孔板格式将该方法用于从900个化合物的化合物库中筛选新抑制剂，发现1个新型活性化合物（IC50 = 26.5 ± 1.5 μM）。与常规荧光检测方法相比，直接MMSA的主要优势在于可在更低的自发荧光干扰下发现新型BACE1抑制剂，并具备出色的动力学研究能力。图形摘要 用于BACE1的微流控迁移率变化实验。
