Tau微管蛋白激酶1（TTBK1）是一种丝氨酸/苏氨酸/酪氨酸激酶，可磷酸化tau蛋白的多个残基。tau过度磷酸化是tau蛋白病（如阿尔茨海默病，AD）的主要病因。因此，通过抑制TTBK1阻止tau磷酸化已被提出作为AD的治疗策略。然而，可用于生化实验的TTBK1底物报道甚少，迄今报道的靶向TTBK1的抑制剂也十分有限。本研究从多肽小库中筛选出荧光素标记（FAM）多肽15，作为人TTBK1（hTTBK1）的最优多肽底物。随后，我们以多肽15建立并验证了微流控迁移率变化实验（MMSA）。我们进一步证实多肽15同样可用于ADP-Glo激酶实验。所建立的MMSA被用于筛选427个化合物的激酶抑制剂库，获得5个对hTTBK1的IC50为微摩尔级的化合物。其中AZD5363、A-674,563和GSK690693以ATP竞争性方式抑制hTTBK1，分子对接模拟显示它们进入ATP结合口袋，并与hTTBK1铰链区形成一个或两个氢键。另一个活性化合物piceatannol对hTTBK1表现出非ATP竞争性抑制作用，可作为开发高选择性hTTBK1抑制剂的起点。综上，本研究为开发新型hTTBK1抑制剂提供了新的体外平台，所获抑制剂有望应用于AD的预防。
