CRISPR-Cas9 介导的靶基因敲除

CRISPR-Cas9 敲除与细胞株构建,实现干净的遗传学验证。我们设计并筛选向导 RNA,分离并验证克隆株,在蛋白水平确认功能缺失——交付同源配对细胞株,使表型比较经得起推敲。

通过 Western blot 验证 Cas9 表达


通过 FACS 验证 Cas9 表达


在单克隆敲除株中通过 Western blot 检测靶点 B 表达(瞬时转染)


CRISPR 靶基因敲除——表型研究

通过慢病毒 sgRNA 感染敲除细胞存活必需基因 PCNA,导致集落形成显著减少


sgCopGFP/sgPCNA 病毒感染后 A549 野生型/Cas9 细胞的 2D 克隆形成实验

A549-野生型

A549-Cas9

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